Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Desmin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400248
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Desmin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Desmin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Desmin Anticuerpo (RD301): sc-23879
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Desmin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400248 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DES codifica la desmina, una proteína de filamentos intermedios de tipo III que forma un armazón citoesquelético esencial en células musculares cardíacas, esqueléticas y lisas. La desmina se integra con las estructuras del disco Z y conecta las miofibrillas con las mitocondrias, los núcleos y el sarcolema, apoyando la mecanotransducción, el posicionamiento de orgánulos y la integridad contráctil. Participa en la organización del citoesqueleto y en procesos de respuesta al estrés que influyen en la estabilidad y la remodelación de las células musculares. La alteración de DES se asocia con miopatías y cardiomiopatías relacionadas con la desmina, caracterizadas por agregación proteica y disfunción muscular progresiva, lo que la hace relevante para estudios de proteostasis y de los mecanismos de degeneración muscular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Desmin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DES en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DES junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DES tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Desmin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DES para la investigación de la señalización de Desmin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DES críticos para la función de Desmin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DES para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Desmin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Desmin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DES. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Desmin (h) y el plásmido HDR Desmin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DES para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DES definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.