Dermcidin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401346-ACT

O DCD humano codifica a dermcidina, um precursor peptídico secretado altamente expresso nas glândulas sudoríparas écrinas, que é processado proteoliticamente em fragmentos antimicrobianos e bioativos. Peptídeos derivados da dermcidina contribuem para a defesa de barreira inata ao desestabilizar membranas microbianas e ao moldar microambientes da pele e das mucosas, enquanto fragmentos adicionais têm sido associados a respostas ao estresse celular e a vias de sinalização de sobrevivência. Alterações na expressão de DCD foram relatadas em contextos inflamatórios e em múltiplos tipos de câncer, nas quais se associam a mudanças na proliferação, na tolerância ao estresse oxidativo e nas interações entre o tumor e o microambiente. Esses atributos tornam o DCD um alvo útil para estudar a homeostase epitelial, a biologia de peptídeos secretados e a regulação do microambiente relevante para o remodelamento associado a doenças.

Dermcidin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dermcidin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dermcidin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dermcidin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dermcidin em células tumorais com expressão de DCD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.