DEPTOR Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430194-ACT

Deptor codifica a DEPTOR, uma proteína de suporte (scaffold) que contém um domínio DEP, liga-se e modula os complexos de mTOR, influenciando os resultados de sinalização tanto de mTORC1 quanto de mTORC2. Por meio do seu impacto na detecção de nutrientes, na síntese proteica, na autofagia e na regulação do citoesqueleto, a DEPTOR ajuda a ajustar o crescimento celular e a adaptação metabólica. Alterações na expressão de DEPTOR têm sido associadas à desregulação da atividade da via de mTOR em contextos como biologia do câncer, sinalização de insulina e função de células imunes, tornando-a um nó útil para estudar feedback da via e respostas ao estresse. Em modelos murinos, Deptor oferece um ponto de entrada viável para investigar como a organização (wiring) da rede de mTOR molda proliferação, diferenciação e homeostase tecidual.

DEPTOR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Deptor sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DEPTOR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Deptor em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Deptor, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DEPTOR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Deptor nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DEPTOR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DEPTOR em células tumorais com expressão de Deptor silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.