DENND4B Double Nickaseプラスミド (h): sc-411384-NIC

DENND4Bは、DENNドメインを含むグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）をコードしており、Rabファミリーの低分子GTPアーゼを制御することで、膜輸送およびエンドソームのリサイクリングを支えています。Rabの活性化状態を調節することにより、DENND4Bは小胞の係留／融合ダイナミクスに寄与し、受容体のターンオーバー、栄養トランスポーターの局在、ならびにエンドメンブレン区画からのシグナル出力に影響を及ぼします。これらの輸送機能は、細胞骨格の編成、細胞極性、ストレス適応応答を制御する経路とも交差しており、DENND4Bは細胞移動やシグナル減衰の研究において重要な結節点となります。DENND4Bに関連するエンドソーム輸送プログラムの制御異常は、膜輸送および受容体シグナルが破綻する疾患状況、例えばがんに伴う細胞リモデリングなどにおいて検討されています。

DENND4B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DENND4B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DENND4B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DENND4Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DENND4Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。