DENND4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407301

概要

DENND4A は、DENN ドメインを含むタンパク質をコードしており、Rab GTPase に対するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）として機能して、エンドソーム輸送および膜リサイクリングを支えます。Rab 依存的な小胞輸送の制御を通じて、DENND4A はカーゴの選別、受容体のターンオーバー、ならびに膜動態を下流経路へ結びつけるシグナル伝達複合体の空間的配置に寄与します。その活性は、栄養感知、細胞骨格の再構築、エンドメンブレン上での区画化されたシグナル伝達といった過程と関連しており、細胞増殖やストレス適応の研究において重要です。小胞輸送の破綻や Rab ネットワーク制御の異常は、がん原性シグナル、代謝バランスの乱れ、神経生物学関連の表現型としばしば結び付けられるため、DENND4A は輸送関連疾患メカニズムを解明するための有用なノードとして位置付けられます。

DENND4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDENND4A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DENND4A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DENND4Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DENND4Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DENND4Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DENND4A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DENND4Aの機能に不可欠なDENND4Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DENND4Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DENND4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDENND4A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DENND4A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DENND4A HDRプラスミド（h）および DENND4A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDENND4Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDENND4A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。