Plásmido CRISPR de Activación (h) DDX60L: sc-413888-ACT

DDX60L (helicasa DEAD-box 60-like) es una helicasa de ARN humana implicada en la defensa antiviral innata, que participa en la detección citosólica de ARN y en programas de genes estimulados por interferón. Se asocia con la regulación del metabolismo del ARN y con las vías de señalización de receptores tipo RIG-I, que moldean las respuestas de interferón de tipo I y las redes transcripcionales posteriores. Como factor inducible por interferón, DDX60L se estudia con frecuencia en el contexto de las interacciones huésped–patógeno y de la señalización inflamatoria. La desregulación del interferón y de las vías de detección de ARN es relevante para la biología de las infecciones y los mecanismos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario, lo que respalda la investigación del control dependiente de DDX60L sobre la replicación viral y las respuestas de citocinas.

DDX60L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DDX60L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DDX60L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DDX60L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DDX60L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DDX60L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DDX60L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DDX60L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DDX60L en células tumorales con expresión de DDX60L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.