Plásmido CRISPR de Activación (m) DDX60: sc-433350-ACT

El gen murino **Ddx60** codifica **DDX60**, una helicasa de ARN de la familia DExD/H inducible por interferón que actúa como sensor citosólico y regulador de la inmunidad innata antiviral. DDX60 participa en el metabolismo del ARN y en vías de reconocimiento de patrones al potenciar la señalización dependiente de RIG-I/MDA5, amplificar las respuestas de interferón de tipo I y sostener programas de expresión de genes estimulados por interferón (ISG) que restringen la replicación viral. Mediante interacciones con sustratos de ARN y componentes de señalización inmunitaria, DDX60 influye en redes transcripcionales impulsadas por NF-κB e IRF y modela las respuestas celulares al estrés por ARN de doble cadena. Por lo tanto, la desregulación de la actividad de Ddx60 es relevante para estudios de señalización inflamatoria, interacciones hospedador–patógeno y mecanismos de enfermedad asociados a la inmunidad en modelos murinos.

DDX60 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ddx60 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DDX60 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ddx60 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ddx60, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DDX60. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ddx60 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DDX60 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DDX60 en células tumorales con expresión de Ddx60 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.