DDX3X Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401253-LAC

DDX3X codifica uma helicase de RNA da família DEAD-box dependente de ATP que coordena múltiplas etapas do metabolismo de RNA, incluindo a exportação de mRNA, o início da tradução e a dinâmica de grânulos de RNA durante o estresse celular. Por meio de interações com complexos ribonucleoproteicos e intermediários de sinalização, a DDX3X conecta a regulação pós-transcricional a vias que controlam a progressão do ciclo celular, o reconhecimento imune inato e as respostas ao estresse. Alterações na atividade de DDX3X têm sido associadas à desregulação da homeostase de RNA e à regulação aberrante de programas de proliferação e diferenciação, tornando-a relevante para estudos de neurodesenvolvimento, biologia de vírus e fatores do hospedeiro, e remodelamento do transcriptoma relacionado ao câncer. Em células humanas, a DDX3X atua como um nó-chave para investigar como a função de helicases de RNA molda os resultados da expressão gênica em condições basais e de estresse.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX3X (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de DDX3X numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX3X (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição DDX3X, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DDX3X. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo DDX3X e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.