DDX32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430371

概要

Dhx32は、マウスのDDX32タンパク質をコードしており、ATP依存性RNAヘリカーゼであるDEAD-boxファミリーに属すると推定されています。これらのタンパク質は、ATPのエネルギーを用いてRNA二次構造やリボ核タンパク質複合体を再編成する働きに関与すると考えられています。このクラスのタンパク質は、pre-mRNAスプライシング、RNA輸送、リボソーム生合成、翻訳など、RNA代謝の中核的プロセスを制御することが一般的であり、DDX32の活性は遺伝子発現プログラムの制御と結び付けられます。RNAヘリカーゼ機能の変化は、細胞周期制御、分化、ストレス適応的な転写応答を乱し得るため、Dhx32は発生や疾患関連の細胞表現型におけるRNAプロセシング経路を研究する上で有用な遺伝子座です。マウス系では、Dhx32を解析することで、RNA代謝とシグナル伝達ネットワーク、ならびに遺伝子型—表現型の関係を結び付ける機構研究を支援します。

DDX32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDhx32遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dhx32内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dhx32のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDX32タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDX32シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dhx32欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDX32の機能に不可欠なDhx32エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dhx32ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDX32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDDX32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dhx32遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDX32 HDRプラスミド（m）および DDX32 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDhx32ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDhx32標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。