DDX30 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411632-LAC

DHX30 codifica a DDX30, uma helicase de RNA do tipo DEAD-box implicada na remodelação, dependente de ATP, de estruturas de RNA e de complexos ribonucleoproteicos. A DDX30 contribui para a regulação gênica pós-transcricional, incluindo o processamento de RNA e o controle associado à tradução, e tem sido relacionada ao metabolismo de RNA mitocondrial e a programas de resposta ao estresse celular. Por meio dessas funções, a atividade de DHX30 pode influenciar a proteostase, a homeostase metabólica e os desfechos de sinalização imune inata que dependem do reconhecimento de RNA e da expressão gênica regulada. A desregulação ou variação genética em DHX30 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a perturbações transcricionais e translacionais mais amplas, relevantes para a modelagem de doenças em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX30 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de DHX30 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX30 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição DHX30, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DDX30. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo DHX30 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.