DDT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418461
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DDT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DDT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DDT Anticorpo (1G1): sc-517061
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DDT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418461 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
DDT (D-dopachrome tautomerase), também conhecido como MIF-2, é uma enzima do tipo citocina que participa da sinalização imune e das respostas ao estresse celular, atuando em conjunto com o eixo MIF. Contribui para a regulação da produção de mediadores inflamatórios, do recrutamento de leucócitos e da sinalização pró-sobrevivência por meio de vias que, dependendo do contexto celular e do receptor utilizado, interagem com as redes MAPK/ERK e NF-κB. A expressão de DDT tem sido associada à modulação da atividade imune inata e adaptativa, com relevância relatada para inflamação associada a tumores, fenótipos autoimunes e desregulação metabólica. Como fator solúvel com atividade enzimática, o DDT oferece um ponto acessível para dissecar como a sinalização por citocinas se integra a programas de redox, proliferação e migração em células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDT (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DDT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DDT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DDT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DDT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DDT para a investigação da sinalização de DDT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DDT críticos para a função DDT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DDT para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DDT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DDT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DDT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DDT Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DDT (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DDT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DDT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.