DDI1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416011

Descripción general

DDI1 (homólogo 1 inducible por daño en el ADN) codifica una proteína conservada evolutivamente implicada en la proteostasis y en las respuestas al estrés, con homología a dominios tipo ubiquitina y a dominios de proteasa retroviral. En células humanas, DDI1 se ha vinculado a procesos dependientes de ubiquitina que influyen en el recambio de proteínas y en la adaptación celular al estrés genotóxico, apoyando el mantenimiento de la integridad del genoma. A través de estas funciones, DDI1 se estudia en vías que conectan la señalización de daño en el ADN, el estrés asociado a la replicación y la degradación regulada de proteínas mal plegadas o dañadas. La proteostasis desregulada y los circuitos de respuesta al estrés se analizan con frecuencia en el contexto de la transformación oncogénica y de fenotipos neurodegenerativos, lo que convierte a DDI1 en una diana útil para la investigación mecanística.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDI1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDI1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDI1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDI1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDI1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDI1 para la investigación de la señalización de DDI1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDI1 críticos para la función de DDI1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDI1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDI1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDI1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDI1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDI1 (h) y el plásmido HDR DDI1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDI1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDI1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.