DDAH II CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403032-ACT

ヒトDDAH2は、非対称性ジメチルアルギニン（ADMA）およびL-NMMAをシトルリンとジメチルアミンに加水分解する細胞質酵素であるジメチルアルギニンジメチルアミノヒドロラーゼII（DDAH II）をコードしており、一酸化窒素合成酵素の活性と一酸化窒素（NO）の生物学的利用能を調節します。メチルアルギニン代謝の制御を通じて、DDAH IIは内皮シグナル伝達、レドックス感受性プロセス、ならびに平滑筋緊張や炎症性シグナル伝達に影響する血管恒常性経路に組み込まれています。DDAH2の発現または活性の変化は、NOシグナルの障害や内皮機能障害の表現型と関連付けられてきました。これらの機序により、DDAH2はヒトモデル系において心代謝ストレス応答、血管炎症、ならびにNO依存性の細胞プログラムを研究する上で重要な標的となります。

DDAH II CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DDAH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDAH II CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DDAH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDDAH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDAH IIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDDAH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDAH II依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDDAH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDAH II経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。