DcR3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404980-ACT

TNFRSF6B codifica o receptor “iscas” 3 (DcR3), um membro solúvel da superfamília de receptores de TNF que se liga ao ligante de Fas (FASLG), LIGHT (TNFSF14) e TL1A (TNFSF15) para modular a sinalização apoptótica extrínseca e a comunicação cruzada inflamatória. Ao sequestrar esses ligantes, o DcR3 pode remodelar a sinalização de receptores de morte, influenciar programas de ativação imune ligados ao NF-κB e afetar o equilíbrio entre sobrevivência celular e morte celular programada. A atividade de DcR3 tem sido associada à evasão imune, a respostas alteradas de células T e a mudanças na sinalização do microambiente mediada por citocinas em múltiplos contextos de doença. Essas propriedades tornam o TNFRSF6B um alvo útil para dissecar a biologia de ligantes da família TNF, a regulação da apoptose e vias relacionadas à inflamação em modelos de células humanas.

DcR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF6B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DcR3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF6B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF6B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DcR3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF6B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DcR3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DcR3 em células tumorais com expressão de TNFRSF6B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.