D5DR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404047-ACT

DRD5 kodiert den humanen Dopaminrezeptor D5 (D5DR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vorwiegend an Gs/olf koppelt, um die Adenylylcyclase zu stimulieren, cAMP zu erhöhen und PKA‑abhängige Signalwege zu aktivieren. D5DR moduliert die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität durch die Regulation von Ionenkanälen und Phosphorylierungsnetzwerken und ist mit MAPK/ERK- sowie anderen Second‑Messenger‑Signalwegen nachgeschaltet der dopaminergen Neurotransmission verknüpft. Expression und Signalgebung von DRD5 werden im Kontext der Funktion dopaminerger Schaltkreise, neurobehavioraler Phänotypen und des Rezeptor‑Crosstalks untersucht, der Antworten auf katecholaminerge Signalübertragung prägt. Eine Fehlregulation der Dopaminrezeptor‑Signalgebung, einschließlich veränderter D5DR‑Aktivität, ist relevant für die Forschung zu neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbedingten Störungen sowie zu Mechanismen der Rezeptordesensibilisierung und des Rezeptor‑Traffickings.

D5DR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DRD5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

D5DR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DRD5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DRD5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen D5DR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DRD5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von D5DR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des D5DR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DRD5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.