Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
D2DR/Dopamine D2 Receptor Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420053
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- D2DR/Dopamine D2 Receptor Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico D2DR/Dopamine D2 Receptor, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: D2DR/Dopamine D2 Receptor Antibody (B-10): sc-5303
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
D2DR/Dopamine D2 Receptor Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420053 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Drd2 codifica il recettore dopaminergico D2 (D2DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica inibendo l’adenilil ciclasi, riducendo la segnalazione cAMP/PKA e regolando l’attività dei canali ionici. Il D2DR influenza anche le vie MAPK/ERK e PI3K-correlate e agisce come autorecettore, controllando il rilascio e la sintesi di dopamina nei circuiti dopaminergici. Nel cervello del topo, Drd2 contribuisce alla segnalazione striatale e corticolimbica alla base di motivazione, apprendimento della ricompensa e controllo motorio. Una segnalazione D2DR disregolata è stata implicata nella biologia di disturbi neuropsichiatrici e del movimento, rendendo Drd2 un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici dei circuiti dopaminergici e della segnalazione mediata da recettori.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO D2DR/Dopamine D2 Receptor (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Drd2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Drd2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Drd2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina D2DR/Dopamine D2 Receptor.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Drd2 per lo studio della segnalazione di D2DR/Dopamine D2 Receptor, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Drd2 critici per la funzione di D2DR/Dopamine D2 Receptor
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Drd2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Drd2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal D2DR/Dopamine D2 Receptor Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR D2DR/Dopamine D2 Receptor (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Drd2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Drd2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.