Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYYR1: sc-404421-ACT

Le gène humain CYYR1 (protéine 1 riche en cystéine et en tyrosine) code une petite protéine de faible complexité, enrichie en cystéine/tyrosine, impliquée dans la régulation de la signalisation cellulaire et de programmes transcriptionnels d’adaptation au stress. Il a été rapporté que l’expression de CYYR1 répond à des stimuli inflammatoires et au stress cellulaire, ce qui suggère un rôle dans la coordination d’interactions entre voies de signalisation influençant l’organisation du cytosquelette, la signalisation associée à l’adhésion et l’expression génique dépendante du contexte. En tant que modulateur putatif des réponses transcriptionnelles induites par les stimuli, CYYR1 présente un intérêt pour disséquer les mécanismes qui couplent des signaux extracellulaires à des réseaux régulateurs en aval. Une dérégulation de l’expression de CYYR1 a été observée dans des profils d’expression associés à des maladies, ce qui étaye son utilité comme cible de recherche dans des études portant sur des phénotypes liés à l’inflammation et des états de signalisation associés aux tumeurs.

CYYR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYYR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYYR1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYYR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYYR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYYR1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYYR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYYR1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYYR1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYYR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.