Cytoplasmic CysRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406444

Visão geral

CARS codifica a cisteinil‑tRNA sintetase citoplasmática (CysRS), uma aminoacil‑tRNA sintetase de classe I que liga a cisteína ao seu tRNA cognato para garantir a fidelidade da tradução no citosol. Ao controlar o fornecimento de tRNA\(^\text{Cys}\) carregado, a CysRS citoplasmática sustenta a síntese proteica global e acopla a disponibilidade de aminoácidos às vias de proteostase, incluindo respostas ao estresse que modulam a tradução. A perturbação da atividade das aminoacil‑tRNA sintetases pode alterar a dinâmica dos ribossomos e desencadear sinalização integrada de estresse, com efeitos a jusante sobre crescimento celular, metabolismo e processos sensíveis ao estado redox que dependem da utilização de cisteína. A desregulação do carregamento de tRNA e do controle de qualidade da tradução é relevante para pesquisas sobre fenótipos do neurodesenvolvimento e neuromusculares, distúrbios proliferativos e adaptação celular ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Cytoplasmic CysRS (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CARS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CARS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CARS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Cytoplasmic CysRS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CARS para a investigação da sinalização de Cytoplasmic CysRS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CARS críticos para a função Cytoplasmic CysRS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CARS para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Cytoplasmic CysRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Cytoplasmic CysRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CARS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Cytoplasmic CysRS Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Cytoplasmic CysRS (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CARS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CARS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.