Cytokeratin 18 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400305-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Cytokeratin 18 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Cytokeratin 18ダブルニカースプラスミド（h）およびCytokeratin 18ダブルニカースプラスミド（h2）は、KRT18を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Cytokeratin 18 抗体 (RGE53): sc-32329
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Cytokeratin 18 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400305-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 18 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400305-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT18はサイトケラチン18をコードしており、サイトケラチン18はI型中間径フィラメントタンパク質の一種です。これはケラチン8とヘテロポリマーを形成し、単層上皮細胞における中核的な細胞骨格ネットワークを構成します。サイトケラチン18は、細胞の機械的安定性、細胞小器官の配置、上皮の極性を支え、さらに有糸分裂やストレス応答の際には、リン酸化依存的なフィラメント再編成によって動的にリモデリングされます。また、カスパーゼによる切断を含むアポトーシスに伴う細胞骨格変化にも関与しており、これが上皮細胞の構造的完全性やシグナル伝達に影響を及ぼし得ます。KRT18の発現変化、フィラメント構造の異常、あるいは切断パターンの変化は、上皮障害やさまざまな病態と関連づけられており、上皮の恒常性やストレスに関する研究において、一般的なマーカーであると同時に機構上の重要な結節点として扱われています。
Cytokeratin 18 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KRT18 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KRT18内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KRT18の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KRT18が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。