cytochrome c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417607

Visão geral

CYCS codifica o citocromo c humano, um transportador de elétrons contendo heme no espaço intermembrana mitocondrial, que transfere elétrons entre o complexo III (citocromo bc1) e o complexo IV (citocromo c oxidase), dando suporte à fosforilação oxidativa e à produção celular de ATP. Para além da bioenergética, o citocromo c é um mediador central da apoptose intrínseca, na qual a permeabilização da membrana externa mitocondrial permite sua liberação para o citosol e a subsequente montagem do apoptossomo com APAF1 e a caspase-9. A função de CYCS se cruza com a homeostase redox, a dinâmica mitocondrial e a sinalização de resposta ao estresse, tornando-o amplamente relevante para estudos de disfunção mitocondrial. Alterações na respiração dependente de citocromo c e na competência apoptótica são frequentemente avaliadas em contextos como neurodegeneração, lesão cardiometabólica e fenótipos de sobrevivência de células cancerosas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO cytochrome c (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CYCS em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CYCS, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CYCS na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína cytochrome c.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CYCS para a investigação da sinalização de cytochrome c, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CYCS críticos para a função cytochrome c
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CYCS para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo cytochrome c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo cytochrome c Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CYCS. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo cytochrome c Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR cytochrome c (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CYCS para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CYCS definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.