cystatin SA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406907

概要

CST2はシスタチンSAをコードしており、シスタチンSAは分泌型のシステインプロテアーゼ阻害因子として、粘膜表面におけるパパイン様カテプシンおよび関連するタンパク質分解活性を抑制します。プロテアーゼ／抗プロテアーゼのバランスを調節することで、シスタチンSAは口腔および上部消化・呼吸器領域の微小環境における細胞外マトリックスのターンオーバー、ペプチドのプロセシング、炎症性シグナル伝達の制御に寄与します。唾液中シスタチンの発現変化は、炎症性疾患やがん近傍の表現型にわたって観察される、自然免疫防御、マイクロバイオームとの相互作用、ならびにタンパク質分解に関連した組織リモデリングの変化と関連づけられています。そのためCST2は、上皮バリア機能や分泌タンパク質群（セクレトーム）の組成に影響する、プロテアーゼ駆動性経路を研究する上で重要な遺伝子です。

cystatin SA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCST2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CST2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CST2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cystatin SAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cystatin SAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CST2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cystatin SAの機能に不可欠なCST2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CST2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cystatin SA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcystatin SA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CST2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cystatin SA HDRプラスミド（h）および cystatin SA HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCST2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCST2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。