CysLT₂ Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403435-ACT

O gene humano **CYSLTR2** codifica o receptor 2 de leucotrienos cisteínicos (receptor **CysLT2**), um receptor acoplado à proteína G que se liga a **LTC4**, **LTD4** e **LTE4** para regular a sinalização inflamatória. A ativação do receptor pode acoplar-se a **Gq/PLCβ** para elevar o **Ca2+** intracelular, acionar vias de **MAPK** e modular a permeabilidade endotelial, o tônus do músculo liso e o recrutamento de leucócitos. A atividade de **CYSLTR2** integra-se à biologia do ácido araquidônico e dos eicosanoides, influenciando a produção de citocinas e a remodelação tecidual em contextos imunes e vasculares. A sinalização desregulada de receptores de leucotrienos e variantes recorrentes de **CYSLTR2** têm sido associadas a mecanismos de doenças inflamatórias e a programas de sinalização oncogênica em algumas malignidades, sustentando sua utilidade como um nó de via em estudos mecanísticos.

CysLT2 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYSLTR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CysLT2 Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYSLTR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYSLTR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CysLT2 Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYSLTR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CysLT2 Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CysLT2 Receptor em células tumorais com expressão de CYSLTR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.