CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419932-ACT
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (m)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (m)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- CYP7A1 CRISPR活性化プラスミド（m）およびCYP7A1 CRISPR活性化プラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cyp7a1転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CYP7A1 抗体 (E-10): sc-518007
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (m) | sc-419932-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (m2) | sc-419932-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
マウスCyp7a1は、コレステロール7α-水酸化酵素（CYP7A1）をコードしており、肝臓に豊富に発現するシトクロムP450酵素として、コレステロールから古典的胆汁酸合成経路へ至る律速段階を触媒します。CYP7A1はコレステロールを7α-ヒドロキシコレステロールへ変換することで胆汁酸プールの量と組成を規定し、FXR/FGF15を介した腸肝循環シグナル伝達、ならびにその下流にある脂質・糖・エネルギー代謝の制御に影響を及ぼします。Cyp7a1活性は、肝コレステロール恒常性と胆汁酸依存的な転写プログラムを統合し、リポタンパク質代謝や生体異物処理ネットワークとも交差します。CYP7A1発現の破綻は、胆汁酸シグナルが撹乱された高コレステロール血症、脂肪肝表現型、代謝性炎症モデルなどの文脈で頻繁に研究されています。
CYP7A1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cyp7a1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
CYP7A1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cyp7a1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCyp7a1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP7A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCyp7a1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP7A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCyp7a1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP7A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。