Cyp4f15 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430669-ACT

Cyp4f15 は、マウスのシトクロム P450 4F ファミリーに属するモノオキシゲナーゼをコードしており、脂肪酸やエイコサノイドの水酸化など、内因性脂質の酸化的代謝を触媒します。これらの反応は、炎症シグナル伝達や脂質恒常性の形成に関与します。小胞体（ER）関連酵素として、Cyp4f15 は異物代謝および脂質の生体内変換ネットワークに寄与し、レドックスバランス、膜脂質リモデリング、ならびに下流の免疫調節経路と交差します。CYP4F を介した酸化の制御が変化すると、代謝ストレスや炎症性刺激に対する組織応答に影響し得るため、Cyp4f15 は肝臓や免疫関連の文脈における脂質メディエーターのターンオーバーを研究する上で有用なノードとなります。これらの過程は、治療効果を示唆することなく、代謝異常や炎症関連表現型のモデルにおいてしばしば検討されます。

Cyp4f15 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cyp4f15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cyp4f15 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cyp4f15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCyp4f15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cyp4f15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCyp4f15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCyp4f15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCyp4f15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCyp4f15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。