CYP2F1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404064-ACT

O CYP2F1 humano codifica uma mono-oxigenase do citocromo P450 que catalisa o metabolismo oxidativo de xenobióticos e de substratos endógenos, contribuindo para a capacidade celular de desintoxicação. A atividade do CYP2F1 está associada ao equilíbrio redox e a vias de bioativação que podem influenciar a formação de metabólitos reativos, as respostas ao estresse oxidativo e a sinalização a jusante em tecidos expostos. Como parte da rede enzimática de P450, ele se cruza com vias que regulam a detecção de substâncias químicas, a homeostase metabólica e a sinalização inflamatória. Alterações na expressão ou na atividade do CYP2F1 são relevantes para estudar a variabilidade interindividual na suscetibilidade a agentes químicos e os mecanismos que conectam o metabolismo de xenobióticos a fenótipos de lesão tecidual.

CYP2F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP2F1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP2F1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP2F1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP2F1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP2F1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP2F1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP2F1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP2F1 em células tumorais com expressão de CYP2F1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.