Particules Lentivirales d'Activation (m) CYP2E1: sc-419917-LAC

Le gène murin **Cyp2e1** code la protéine **CYP2E1**, une enzyme microsomale du cytochrome P450 qui catalyse l’oxydation de petites molécules et de substrats endogènes dans des tissus hépatiques et extra-hépatiques. L’activité de CYP2E1 est étroitement liée au transfert d’électrons dépendant du NADPH et peut augmenter la production d’espèces réactives de l’oxygène, reliant ainsi cette enzyme au stress oxydatif, à la peroxydation lipidique et à l’homéostasie redox cellulaire. Via ses interactions avec le métabolisme des xénobiotiques, l’oxydation des acides gras et la signalisation inflammatoire, les modifications d’expression de CYP2E1 sont fréquemment étudiées dans des modèles de stéatose, de lésion hépatique induite par des toxiques, de résistance à l’insuline et de neuroinflammation. En tant que régulateur de la bioactivation métabolique et des réponses au stress, **Cyp2e1** est largement étudié pour son impact sur la fonction mitochondriale, le stress du réticulum endoplasmique (RE) et les programmes transcriptionnels qui déterminent la susceptibilité des tissus aux lésions.

Les particules d'activation lentivirales CYP2E1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cyp2e1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP2E1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cyp2e1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP2E1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cyp2e1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.