CYP2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403450-ACT

CYP2A13 は、CYP2A サブファミリーに属するヒトのシトクロム P450 モノオキシゲナーゼをコードしており、多様な外因性化合物（ゼノバイオティクス）および内因性基質の酸化的代謝を触媒します。第 I 相生体内変換の構成要素として、CYP2A13 はレドックス依存性反応を担い、吸入性および全身性の化学物質に対する細胞の曝露量を規定することで、その後の解毒や酸化ストレス関連経路に影響を及ぼします。その発現量と活性は代謝能の個体差に寄与するため、化学物質感受性や曝露生物学における遺伝子型—表現型の関連を検討する研究において重要です。そのため CYP2A13 は、P450 を介した代謝がヒトの系において上皮生物学、炎症シグナル、発がん物質の生体内活性化機構とどのように交差するかを調べるモデルとして広く用いられています。

CYP2A13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2A13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2A13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2A13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2A13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2A13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2A13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2A13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2A13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2A13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。