CYP21A2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402919-ACT

CYP21A2 codifica a 21-hidroxilase do citocromo P450, uma monooxigenase associada ao retículo endoplasmático necessária para a esteroidogênese adrenal. Ao catalisar etapas de 21-hidroxilação na biossíntese de precursores de cortisol e aldosterona, o CYP21A2 ajuda a regular as vias de glicocorticoides e mineralocorticoides que determinam o equilíbrio eletrolítico e a sinalização endócrina responsiva ao estresse. Alterações na expressão ou na atividade de CYP21A2 perturbam o fluxo de hormônios esteroides no córtex adrenal, influenciando programas transcricionais a jusante controlados por receptores nucleares de hormônios. A desregulação desse gene está fortemente associada a fenótipos de hiperplasia adrenal congênita e é frequentemente estudada em genética endócrina e pesquisa em metabolismo de esteroides.

CYP21A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYP21A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CYP21A2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYP21A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYP21A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CYP21A2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYP21A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CYP21A2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CYP21A2 em células tumorais com expressão de CYP21A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.