CYP1A1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419897-NIC

Il gene murino **Cyp1a1** codifica il citocromo P450 1A1 (CYP1A1), una monoossigenasi microsomiale che catalizza il metabolismo ossidativo di xenobiotici e substrati endogeni, inclusi la bioattivazione e la detossificazione degli idrocarburi policiclici aromatici. CYP1A1 è un effettore canonico a valle della segnalazione del recettore degli idrocarburi arilici (AHR), collegando i ligandi ambientali a programmi trascrizionali che regolano il metabolismo di fase I e si coordinano con le vie di coniugazione di fase II. La sua attività influenza l’equilibrio redox cellulare attraverso la formazione di metaboliti reattivi e la modulazione delle risposte allo stress ossidativo, con implicazioni per la segnalazione del danno al DNA e l’infiammazione. Un’espressione o un’attività di CYP1A1 deregolate sono spesso utilizzate come biomarcatore di alterazioni della via AHR e sono rilevanti per studi sulla suscettibilità ai tossici, sul metabolismo dei cancerogeni e sull’adattamento metabolico tessuto-specifico.

CYP1A1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cyp1a1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cyp1a1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cyp1a1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cyp1a1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.