cyclin G2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403620-ACT

CCNG2 codifica a ciclina G2, uma ciclina atípica que atua predominantemente como reguladora negativa da progressão do ciclo celular e da proliferação celular. A ciclina G2 é induzida por sinais inibidores de crescimento e por estresse, e contribui para o controle de checkpoints ao modular a atividade de quinases dependentes de ciclina e integrar sinais de vias como respostas dependentes de p53 e redes regulatórias associadas a fosfatases. Por meio de efeitos na transição G1/S, na diferenciação e na sensibilidade à apoptose, a expressão de CCNG2 é frequentemente estudada no contexto de alterações no controle do ciclo celular observadas no câncer e em outros distúrbios proliferativos. A desregulação de CCNG2 também tem sido associada a mudanças na invasão, em fenótipos ligados à metástase e em vias de resposta à terapia em modelos tumorais, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de restrição do crescimento.

cyclin G2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCNG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cyclin G2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCNG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCNG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cyclin G2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCNG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cyclin G2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cyclin G2 em células tumorais com expressão de CCNG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.