cyclin D3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400634-ACT

O CCND3 codifica a ciclina D3, uma ciclina regulatória que forma complexo com CDK4/6 para fosforilar proteínas da família RB e promover a progressão do ciclo celular de G1 para S. Por meio do controle da transcrição dependente de E2F e da integração de sinais mitogênicos, a ciclina D3 ajuda a coordenar a proliferação com programas de diferenciação nas linhagens hematopoética e linfoide. A expressão ou atividade desregulada de CCND3 tem sido associada a alterações no controle do ciclo celular e está implicada em contextos de sinalização oncogênica nos quais a atividade ciclina D–CDK está aumentada. Consequentemente, o CCND3 é amplamente estudado em vias que governam a proliferação, a regulação de checkpoints e o controle do crescimento específico de linhagem.

cyclin D3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCND3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cyclin D3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCND3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCND3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cyclin D3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCND3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cyclin D3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cyclin D3 em células tumorais com expressão de CCND3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.