CUL-4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401967

Übersicht

CUL4A kodiert Cullin-4A, ein zentrales Gerüstprotein des CRL4-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexes, der die Ubiquitinierung und den proteasomalen Abbau von Proteinen koordiniert, die die DNA-Replikation, die Chromatindynamik und den Zellzyklusverlauf steuern. Durch die Zusammenarbeit mit Adapterproteinen wie DDB1 und mehreren DCAF-Substratrezeptoren reguliert CUL-4A unter anderem die Nukleotid-Exzisionsreparatur, die Replikationslizenzierung und Reaktionen auf UV-induzierte DNA-Schäden. Eine Störung der CUL4A-abhängigen Proteostase kann die Genomstabilität und die Checkpoint-Kontrolle beeinträchtigen und verknüpft eine veränderte CRL4-Aktivität mit krebsassoziierten Phänotypen sowie anderen Erkrankungen, die mit defekter DNA-Reparatur einhergehen. Als zentraler Knotenpunkt in der Ubiquitin-vermittelten Signalübertragung wird CUL-4A häufig in Signalwegen untersucht, die Chromatinregulation mit Replikationsstress und transkriptioneller Kontrolle koppeln.

Das CUL-4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CUL4A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CUL4A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CUL4A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CUL-4A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CUL4A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CUL-4A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CUL4A-Exone abzielen, die für die CUL-4A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CUL4A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CUL-4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CUL-4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CUL4A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CUL-4A HDR-Plasmid (h) und CUL-4A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CUL4A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CUL4A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.