CtBP2 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-401865-LAC-2

Das menschliche CTBP2-Gen kodiert das C-terminal binding protein 2 (CtBP2), einen NADH-sensitiven transkriptionellen Koregulator, der überwiegend als Korepressor wirkt, indem er mit sequenzspezifischen Transkriptionsfaktoren und chromatinmodifizierenden Enzymen zusammenarbeitet, um Programme der Genexpression zu steuern. CtBP2 verknüpft den metabolischen Zustand mit epigenetischer Kontrolle, indem es Histondeacetylasen und weitere Remodelling-Komplexe rekrutiert, und beeinflusst dadurch Prozesse wie die epithelial-mesenchymale Transition, die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten sowie die synapsenassoziierte Transkription in Neuronen (einschließlich Funktionen, die mit der CtBP2/RIBEYE-Isoform in Verbindung stehen). Eine Fehlregulation CTBP2-abhängiger transkriptioneller Netzwerke wurde mit Tumorprogression und Metastasierungsbiologie sowie mit neuroentwicklungsbezogenen und sensorischen Phänotypen assoziiert, was CTBP2 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien macht. Die Geneditierung von CTBP2 ermöglicht die funktionelle Untersuchung transkriptioneller Repressionsschaltkreise, die Kartierung von Abhängigkeiten bei Protein-Protein-Interaktionen und die Analyse pathway-spezifischer genregulatorischer Effekte in menschlichen Zellmodellen.

CtBP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CTBP2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CtBP2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CTBP2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CtBP2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CTBP2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.