CtBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400667-ACT

CTBP1 codifica a proteína de ligação ao terminal C 1 (CtBP1), um correpressor transcricional sensível ao NADH que integra o estado metabólico com programas de expressão gênica. A CtBP1 forma complexos com fatores de ligação ao DNA específicos de sequência e com modificadores de cromatina para regular a repressão e a ativação transcricionais, influenciando a transição epitélio–mesênquima, a progressão do ciclo celular, a apoptose e a diferenciação. Ela participa de vias de remodelamento de cromatina e de controle transcricional ao recrutar desacetilases de histonas e outros reguladores epigenéticos, moldando assim a identidade celular e as respostas ao estresse. A atividade desregulada de CTBP1 tem sido associada a redes transcricionais oncogênicas e a decisões alteradas de destino celular em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de transcrição e epigenética.

CtBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CtBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CtBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CtBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CtBP1 em células tumorais com expressão de CTBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.