CSN6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404057-ACT

O gene humano COPS6 codifica a CSN6, uma subunidade central do signalossoma COP9 que regula as ligases E3 de ubiquitina do tipo cullin-RING por meio do controle da dinâmica de neddilação e desneddilação das cullinas. Ao modular a atividade das CRLs, a CSN6 influencia a proteostase dependente de ubiquitina, a progressão do ciclo celular, a sinalização de dano ao DNA e programas transcricionais responsivos ao estresse. A CSN6 tem sido associada à estabilidade alterada de proteínas regulatórias-chave, conectando a função do signalossoma COP9 a redes de sinalização oncogênica e a outros distúrbios caracterizados por turnover proteico desregulado. Essas propriedades tornam o COPS6 um alvo relevante para estudar a comunicação cruzada entre o sistema ubiquitina–proteassoma e a transdução de sinais, bem como a regulação associada à cromatina.

CSN6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPS6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CSN6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPS6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPS6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CSN6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPS6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CSN6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CSN6 em células tumorais com expressão de COPS6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.