Plasmide CRISPR d'Activation (h) CSH1: sc-401213-ACT

CSH1 code l’hormone somatomammotrope chorionique 1, une hormone glycoprotéique placentaire appartenant à la famille hormone de croissance/prolactine, qui module l’adaptation métabolique maternelle et soutient la croissance fœtale pendant la grossesse. CSH1 est principalement exprimé par les syncytiotrophoblastes et agit via des voies de signalisation associées aux récepteurs de cytokines, notamment JAK/STAT et des programmes transcriptionnels apparentés qui coordonnent la répartition des nutriments, la sensibilité à l’insuline et les réponses lactogènes. Dans la littérature, une expression placentaire altérée de CSH1 a été associée à une fonction placentaire compromise et à des phénotypes de grossesse défavorables, ce qui en fait un indicateur moléculaire utile de la différenciation des trophoblastes et de la biologie endocrine placentaire. En recherche, CSH1 est couramment utilisé comme marqueur et nœud fonctionnel au sein des voies qui régissent le développement placentaire, la sécrétion hormonale et la communication materno-fœtale.

CSH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CSH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CSH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CSH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CSH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CSH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.