CRP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401767-ACT

A proteína C-reativa (PCR) é uma pentraxina secretada, produzida principalmente por hepatócitos como parte da resposta de fase aguda, e atua como uma molécula solúvel de reconhecimento de padrões que se liga à fosfocolina em superfícies microbianas e em células danificadas. Ao engajar receptores Fcγ e ativar a cascata clássica do complemento via C1q, a PCR conecta a detecção imune inata à opsonização, à fagocitose e à amplificação inflamatória. A expressão de PCR é induzida transcricionalmente por citocinas pró-inflamatórias, especialmente IL-6, com contribuições de IL-1β e TNF, integrando programas de sinalização mediados por JAK/STAT e NF-κB. Níveis desregulados de PCR são amplamente usados como biomarcador de inflamação sistêmica e estão associados a doença cardiometabólica, infecção e fisiopatologia autoimune, sustentando estudos mecanísticos de regulação inflamatória.

CRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRP em células tumorais com expressão de CRP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.