Plásmido CRISPR de Activación (h) CRP: sc-401767-ACT

La proteína C reactiva (PCR) es una pentraxina secretada producida principalmente por los hepatocitos como parte de la respuesta de fase aguda, y actúa como una molécula soluble de reconocimiento de patrones que se une a la fosfocolina en superficies microbianas y en células dañadas. Al interactuar con receptores Fcγ y activar la vía clásica del complemento a través de C1q, la PCR conecta la detección inmunitaria innata con la opsonización, la fagocitosis y la amplificación inflamatoria. La expresión de la PCR se induce a nivel transcripcional por citocinas proinflamatorias, en especial IL-6, con contribuciones de IL-1β y TNF, integrando programas de señalización impulsados por JAK/STAT y NF-κB. Los niveles desregulados de PCR se utilizan ampliamente como biomarcador de inflamación sistémica y se asocian con enfermedad cardiometabólica, infección y fisiopatología autoinmunitaria, lo que respalda estudios mecanísticos sobre la regulación de la inflamación.

CRP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRP en células tumorales con expresión de CRP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.