CRF-RI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400730-ACT

CRHR1は、コルチコトロピン放出因子受容体1（CRF-R1）をコードしており、CRHおよびウロコルチンに結合して細胞のストレスシグナル伝達を調節するクラスBのGPCRです。活性化されると、CRF-R1は主にGsと共役してアデニル酸シクラーゼを刺激し、cAMPを増加させ、PKA/CREB依存性の転写プログラムを作動させます。さらに状況に応じて、MAPK/ERK経路やカルシウム関連経路にも結合します。CRHR1を介したシグナルは、HPA軸を通じた神経内分泌応答を調節するとともに、神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、炎症シグナルとのクロストークにも影響します。CRHR1の活性や発現パターンの破綻は、ストレス関連の神経精神疾患様表現型や、より広範な神経内分泌機能障害に関与するとされており、関連するヒト細胞モデルにおける経路の配線（ネットワーク）を解明するための有用な標的となります。

CRF-RI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CRHR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CRF-RI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CRHR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCRHR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CRF-RIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCRHR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCRF-RI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCRHR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCRF-RI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。