CREB3L4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417626-NIC

CREB3L4（cAMP応答エレメント結合タンパク質3様4）は、小胞体（ER）膜に係留されたbZIP型転写因子であり、制御された膜内プロテオリシスによって活性化され、分泌経路の恒常性に関連する遺伝子発現プログラムを調節します。ERストレスシグナル伝達やアンフォールドド・プロテイン・レスポンス（UPR）に関わる転写ネットワークに結びついた細胞応答に関与し、分化や代謝適応に影響を及ぼします。CREB3L4の活性は、ホルモン応答性組織やがんで研究されており、発現量や下流の転写出力の変化が、増殖、生存シグナル、浸潤性表現型の変化と相関する場合があります。これらの特性により、CREB3L4は、ER機能と疾患関連の細胞状態を結び付ける転写制御機構を解明するための有用な標的となります。

CREB3L4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CREB3L4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CREB3L4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CREB3L4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CREB3L4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。