CREB3L3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402596-ACT

CREB3L3 (também conhecido como CREBH) codifica um fator de transcrição bZIP residente no RE (retículo endoplasmático) que é ativado por proteólise intramembranar regulada durante estresse metabólico e inflamatório, permitindo a translocação para o núcleo e o controle transcricional de programas gênicos hepáticos. Ele coordena a homeostase de lipídios e glicose ao modular vias envolvidas no metabolismo de triglicerídeos, na oxidação de ácidos graxos e nas respostas de fase aguda, com efeitos a jusante sobre a remodelação de apolipoproteínas e lipoproteínas. A atividade de CREB3L3 interage com a sinalização de estresse do RE e com redes de imunidade inata, conectando o estado nutricional às respostas transcricionais dos hepatócitos. A desregulação de CREB3L3 tem sido associada a fenótipos cardiometabólicos, incluindo hipertrigliceridemia, fisiopatologia do fígado gorduroso e inflamação sistêmica, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em modelos de doenças metabólicas.

CREB3L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CREB3L3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CREB3L3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CREB3L3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CREB3L3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CREB3L3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CREB3L3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CREB3L3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CREB3L3 em células tumorais com expressão de CREB3L3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.