CRB3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403145-ACT

CRB3（crumbs homolog 3）は、タイトジャンクション関連複合体に局在する頂端側極性タンパク質をコードし、上皮細胞の構築（アーキテクチャ）の形成・維持に寄与します。CRB3は、頂端—基底極性、細胞間接着部位の完全性、ならびに小胞輸送を支えることで、極性関連シグナル伝達ネットワークを介した管腔形成、線毛形成、増殖制御などの過程に関与します。CRB3の発現量や局在の変化は、上皮構造の破綻や組織恒常性の乱れと関連付けられており、これらは腫瘍の進展や転移を扱う研究でしばしば検討される特徴です。保存性の高い極性決定因子として、CRB3はヒト細胞モデルにおいて上皮分化やバリア機能を解析するための分子ツールとして広く用いられています。

CRB3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CRB3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CRB3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CRB3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCRB3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CRB3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCRB3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCRB3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCRB3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCRB3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。