CRALBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402092-ACT

RLBP1 codifica a proteína celular de ligação ao retinaldeído (CRALBP), uma chaperona solúvel de retinoides enriquecida no epitélio pigmentar da retina e na glia de Müller, que se liga ao 11-cis-retinal e ao 11-cis-retinol. Ao estabilizar e trafegar intermediários cis-retinoides, a CRALBP sustenta etapas de isomerização e reciclagem de retinoides que mantêm a disponibilidade do cromóforo dos fotorreceptores no ciclo visual. Essa atividade conecta a RLBP1 ao metabolismo de retinoides, ao transporte subcelular de retinoides e à recuperação, dependente de luz, da competência de fototransdução. Alterações na expressão ou na função de RLBP1 estão associadas a distrofias retinianas hereditárias caracterizadas por adaptação ao escuro prejudicada e degeneração progressiva da retina, tornando-a um ponto útil para estudar a homeostase retiniana e respostas ao estresse.

CRALBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RLBP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRALBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RLBP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RLBP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRALBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RLBP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRALBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRALBP em células tumorais com expressão de RLBP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.