CRABP-II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402978-ACT

CRABP2 codifica a proteína de ligação ao ácido retinoico celular 2 (CRABP-II), um transportador citosólico que se liga ao ácido retinoico all-trans com alta afinidade e regula sua disponibilidade intracelular e a saída de sinalização. Ao controlar a entrega do ácido retinoico aos receptores nucleares de ácido retinoico (RARs), a CRABP-II molda programas transcricionais que governam a diferenciação epitelial, a biologia dos queratinócitos e o padrão de desenvolvimento. Alterações na expressão de CRABP2 têm sido associadas à desregulação da sinalização de retinoides em fenótipos relacionados ao câncer, incluindo mudanças na proliferação, migração e estados de diferenciação. Assim, este gene é relevante para o estudo de redes gênicas responsivas a retinoides, tamponamento de ligantes e remodelação transcricional dependente do contexto.

CRABP-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRABP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CRABP-II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRABP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRABP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CRABP-II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRABP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CRABP-II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CRABP-II em células tumorais com expressão de CRABP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.