CPTI-M Plasmide Double Nickase (h): sc-401456-NIC

CPT1B codifica la carnitina palmitoiltransferasi 1B (CPTI-M), l’enzima della membrana mitocondriale esterna associato al muscolo che catalizza la formazione, fase limitante la velocità, delle acilcarnitine a catena lunga necessarie per l’importazione nei mitocondri e la successiva β-ossidazione. Controllando l’ingresso degli acidi grassi nella matrice mitocondriale, CPTI-M contribuisce a regolare il catabolismo lipidico, l’omeostasi energetica e il passaggio di substrato tra acidi grassi e glucosio, integrandosi con la segnalazione AMPK, con i programmi di trascrizione metabolica guidati dai PPAR e con il controllo del flusso degli acidi grassi mediato dal malonil-CoA. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CPT1B sono state associate a una deregolazione dell’ossidazione degli acidi grassi, a stress lipotossico e a rimodellamento metabolico rilevanti per fenotipi cardiometabolici e per l’energetica muscolare. In ambito di ricerca, CPT1B viene comunemente studiato nel contesto della funzione mitocondriale, della profilazione delle acilcarnitine, della capacità ossidativa e dell’adattamento metabolico alla disponibilità di nutrienti.

CPTI-M Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CPT1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CPT1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CPT1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CPT1B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.