CPSF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403190

Visão geral

CPSF4 (fator de especificidade de clivagem e poliadenilação, subunidade 4) codifica um componente central da maquinaria de processamento da extremidade 3′ do mRNA, que reconhece sinais de poliadenilação e coordena a clivagem e a adição da cauda poli(A). Por meio de seu papel no complexo de clivagem e poliadenilação, o CPSF4 ajuda a regular a maturação dos transcritos, a poliadenilação alternativa e o nível de expressão gênica, influenciando a estabilidade do mRNA e a tradução. Alterações em fatores de processamento da extremidade 3′ podem deslocar o uso de sítios de poli(A) e reprogramar amplamente redes transcricionais, conectando a biologia associada ao CPSF4 ao controle do ciclo celular, às respostas ao estresse e a programas de diferenciação. Processamento de RNA desregulado e poliadenilação alternativa são frequentemente observados no câncer e em outros contextos proliferativos ou do neurodesenvolvimento, tornando o CPSF4 um alvo relevante para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CPSF4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CPSF4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CPSF4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CPSF4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CPSF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CPSF4 para a investigação da sinalização de CPSF4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CPSF4 críticos para a função CPSF4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CPSF4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CPSF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CPSF4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CPSF4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CPSF4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CPSF4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CPSF4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CPSF4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.