CPS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403519

Visão geral

CAD codifica um complexo enzimático citosólico multifuncional que catalisa as primeiras etapas comprometidas da biossíntese de pirimidinas de novo, com a CPS2 (carbamoil-fosfato sintetase 2) iniciando a conversão de glutamina e bicarbonato em direção à produção de UMP. Essa atividade sustenta a homeostase do pool de nucleotídeos necessária para a replicação do DNA, a transcrição de RNA e a síntese de fosfolipídios de membrana, conectando a função de CAD à progressão do ciclo celular e à adaptação metabólica. CAD é regulada por vias de sinalização de nutrientes e de crescimento, incluindo controle alostérico por PRPP e inibição por feedback por UTP, e é modulada por fosforilação a jusante da sinalização MAPK/mTOR. A desregulação do metabolismo de pirimidinas e alterações na atividade de CAD têm sido associadas a fenótipos proliferativos e à reprogramação metabólica observada em múltiplos contextos de doença, tornando-a um ponto útil para estudar respostas ao estresse de nucleotídeos e a manutenção do genoma.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CPS2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CAD em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CAD, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CAD na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CPS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CAD para a investigação da sinalização de CPS2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CAD críticos para a função CPS2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CAD para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CPS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CPS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CAD. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CPS2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CPS2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CAD para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CAD definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.