Plasmide CRISPR d'Activation (h) CPI-17: sc-401966-ACT

Le gène humain **PPP1R14A** code **CPI-17**, un inhibiteur de la phosphatase des chaînes légères de la myosine (MLCP) dépendant de la phosphorylation, qui amplifie la contraction du muscle lisse en maintenant la phosphorylation de la chaîne légère régulatrice de la myosine. Lorsqu’elle est activée par des kinases telles que **PKC** et **ROCK**, CPI-17 relie la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G à la sensibilisation au Ca²⁺, en intégrant des voies qui contrôlent la dynamique du cytosquelette, la contractilité cellulaire et la motilité. Ce nœud régulateur est largement pertinent pour la physiologie du muscle lisse vasculaire et des voies aériennes, ainsi que pour les mécanismes de remodelage actomyosine dans les cellules non musculaires. Une dérégulation de la signalisation **PPP1R14A/CPI-17** a été étudiée dans des contextes impliquant un tonus contractile anormal et un remodelage, notamment dans la biologie des maladies cardiovasculaires et pulmonaires.

CPI-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP1R14A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CPI-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP1R14A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP1R14A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CPI-17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP1R14A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CPI-17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CPI-17 dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP1R14A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.