CPEB2 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-409367-ACT-2

ヒトCPEB2（cytoplasmic polyadenylation element binding protein 2）はRNA結合タンパク質であり、3′UTRに存在する細胞質ポリアデニル化エレメントを認識して、状況に応じてpoly(A)テール長、mRNAの安定性、および翻訳を調節する。転写後段階での遺伝子発現制御を協調的に担うことで、CPEB2は標的転写産物を選択的に制御し、細胞周期の進行、ストレス応答性の翻訳リプログラミング、低酸素に関連するシグナル伝達などの過程に寄与する。CPEB2の発現や活性の変化はRNA代謝の破綻と関連づけられており、翻訳制御が乱れるがん生物学、神経機能、その他の疾患の文脈で研究されている。CPEB2を遺伝子編集することで、RNA制御ネットワークの機序解明、転写産物特異的な翻訳影響のマッピング、ならびにヒト細胞モデルにおける3′UTR介在性制御の機能的検証が可能となる。

CPEB2 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CPEB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CPEB2 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における CPEB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCPEB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CPEB2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCPEB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCPEB2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCPEB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCPEB2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。