Plasmide CRISPR d'Activation (h) COX5a: sc-405025-ACT

COX5A code la sous-unité 5A de la cytochrome c oxydase (COX5a), un composant du complexe IV mitochondrial codé par le noyau, qui soutient le transfert d’électrons vers l’oxygène et une phosphorylation oxydative efficace. En modulant l’assemblage et l’activité de la cytochrome c oxydase, COX5a influence le flux de la chaîne respiratoire, le potentiel de membrane mitochondriale et la production d’ATP, avec des effets en aval sur la signalisation des ROS et l’adaptation métabolique. Une altération de la fonction du complexe IV est largement pertinente pour la dysfonction bioénergétique mitochondriale, laquelle a été impliquée dans la neurodégénérescence, des phénotypes cardiométaboliques et le remodelage métabolique des cellules tumorales. L’expression de COX5A et l’intégrité du complexe IV sont donc couramment examinées dans des études sur les réponses au stress mitochondrial, l’adaptation à l’hypoxie et les décisions de destinée cellulaire dépendantes de l’énergie.

COX5a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COX5A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COX5a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COX5A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COX5A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COX5a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COX5A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COX5a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COX5a dans les cellules tumorales présentant une expression de COX5A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.