Plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 2 (h): sc-406301

Présentation

CNTN2 code la contactine 2 (TAG-1), une molécule d’adhérence cellulaire de la superfamille des immunoglobulines, ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI) et particulièrement abondante dans le système nerveux. La contactine 2 participe au guidage axonal, à la croissance des neurites et à la stabilisation des interactions neurone–glie en organisant des complexes de reconnaissance à la surface cellulaire et en modulant le remodelage du cytosquelette lors de la formation des circuits neuronaux. Elle contribue à l’assemblage et au maintien de domaines membranaires spécialisés, tels que les segments initiaux de l’axone et les juxtaparanœuds, via des interactions avec la matrice extracellulaire et des partenaires d’adhérence. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CNTN2 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la connectivité synaptique et de l’excitabilité neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNTN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNTN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNTN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Contactin 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNTN2 pour l'étude de la signalisation de Contactin 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CNTN2 essentiels à la fonction de Contactin 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNTN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Contactin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Contactin 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNTN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Contactin 2 plasmide HDR (h) et le Contactin 2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNTN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNTN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.